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具体解析细胞破碎机使用过程中的问题

2019-03-26 13:10  来源:上海熙扬  143人参与
  问题一:从细胞中提取酶,破碎时间长会影响到酶的活性,怎么办?
  解析:如果需要的是胞内酶,细胞破碎程度和需要的酶获得之间基本上有正比关系。破碎时间长的确会影响到酶的活性。这就需要在破碎时间和酶活性之间做出判断,直接的办法是先绘制相关曲线(酶活性和时间的关系曲线)。如果实验中破碎的是棒状杆菌(也是很难破壁的G+菌),破碎时间控制在30min左右,酶活较好。如果是基质菌丝的话,好可以考虑用溶菌酶处理一下。
  问题二:怎样合理选择超声波破碎参数(条件)?
  解析:不同型号的设备功率不一样,功率的大小决定了使用变幅杆的大小范围(直径2mm至几十毫米),你使用多大的变幅杆就在设备的上调至该刻度(很简单的)!变幅杆的大小决定了处理量。一般情况,5ml以下选3mm,5~50ml可选6~8mm,50ml以上选10mm以上的变幅杆!占空比不用关心,主要是指超声时间和停顿时间的比值。
  问题三:为什么用塑料大试管,玻璃的不可以吗?
  解析:不可以的,如果使用玻璃管,可能会碎裂,而通常使用的是塑料试管。超声波是物质介质中的一种弹性机械波,它既是一种波动形式,又是一种能量形式。超声对细胞的作用主要有热效应,空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时,摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动,使部分能量转化为局部高热(42-43℃)。空化效应是在超声照射下,生物体内形成空泡,随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡。另外,空化泡破裂时产生瞬时高温(约5000℃)、高压(可达500×104Pa),可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子,由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应,超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化,引起细胞结构损伤。损伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。
  问题四: 100g大肠杆菌溶于1L破碎液里(破碎掖:50mM Tris-Cl(PH8.5) 5mM EDTA 0.14M NaCl),搅拌,发现菌液发粘,菌体不能够很好分散,用高压匀质机破碎,加压后,菌液不能进入匀质机,速度很慢,请问是何原因?
  解析:能有好的办法解决,很好用匀质机快速破碎菌体?解析:将破碎液的量加大,不能很好分散可能是量太大;超声处理5-10分钟,菌液粘度即可大大降低,也可促进菌体分散。

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